« Cytométrie en flux/Le cytomètre en flux » : différence entre les versions

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Lorsque pour un paramètre ou un combinaison de paramètres l’analyse révèle plusieurs sous-populations, il est possible de limiter l’acquisition pour d’autres paramètres, à une seule d’entre elles. On parle d’analyse conditionnée. Cette approche est particulièrement intéressante dans l’élimination des objets parasites tels que les doublets ou le bruit de fond.
Par ailleurs, les histogrammes fournis par une analyse en flux se révèlent parfois complexes, et l’extraction des informations qu’ils contiennent nécessite alors l’utilisation de programmes informatiques spécifiques. Les programmes de ce type fournissent des statistiques plus ou moins élaborées, coefficients de variation, pourcentage en fonction des régions, corrélation entre paramètres, directement à partir des données « brutes ». Certains logiciel plus spécifiques, travaillent à partir de modèles tels que ceux qui ont été développés dans le cadre des études du cycle cellulaire.
 
Le Tri
 
Au delà de l'analyse, la particularité de la CMF est d'offrir la possibilité de séparer physiquement des sous-populations mises en évidence par l'analyse.
 
- La première étape, consiste à délimiter les sous-populations que l'on souhaite trier, par ce qu'il est convenu d'appeler des fenêtres de tri. Celles-ci pourront être définies aussi bien sur des histogrammes monoparamétrés que biparamétrés.
- Par ailleurs, on soumet la buse d'où sort le jet à une vibration de faible amplitude mais de relativement haute fréquence (20 à 30 KHz), qui a pour effet de fractionner le jet en gouttelettes.
- Lorsque qu'une cellule analysée a été classée dans une fenêtre de tri, l'appareil soumet le jet à une impulsion électrique au moment où cette cellule arrive à l'extrémité du jet non fractionné. L'excès de charge (+ ou -) résultant, est conservé par la gouttelette contenant la cellule, au moment ou elle se sépare du jet initial.
- En passant ensuite entre deux plaques à haute-tension, cette gouttelette est déviée en fonction de sa charge, pour être collectée dans un tube disposé à cet effet.
 
Il est ainsi possible de trier simultanément jusqu'à 4 sous-populations révélées par l'analyse. Les cellules triées peuvent ensuite être l'objet d'analyse biochimiques ou de biologie moléculaire, d'études microscopiques, ou, dans le cas de travail sur cellules vivantes, peuvent être remise en culture.
Technique largement reconnue et mise à contribution dans de nombreux domaines de la biologie, la CMF a pris aujourd'hui différents aspects, tant par ses applications, que par le matériel utilisé.