« Cytométrie en flux/La fluorescence » : différence entre les versions
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La '''fluorescence''' est un phénomène chimique, mettant en jeu des transitions électroniques entre deux niveaux d'énergie superficiels, et déclenchée par autre chose que la simple chaleur, ce qui la différencie de l'incandescence.
==Principe==
De nombreuses molécules sont capables d'absorber des photons, et d'augmenter leur énergie d'agitation: la lumière est alors convertie en chaleur. Les molécules fluorescentes - on parle de ''fluorophores'' ou de ''fluorochromes''- ont la propriété d'absorber de l'énergie lumineuse et de la restituer, généralement avec une énergie plus basse (une longueur d'onde plus grande).
Ces molécules fluorescentes sont de taille et de nature chimiques diverse ; certaines sont suffisement petites pour être conjuguées à d'autre molécules (comme dans le cas des anticorps couplés à un fluorochromes); d'autres ne sotn fluorescentes que dans certains états de chélation (comme les marqueur fluorescents vitaux, qui ne sont fluorescent que complexé à l'ADN).
Chaque fluorochrome est caractérisé par:
*sa longueur d'onde d'excitation: la lumière à lui fournir pour que la molécule "fluoresce".
*sa longueur d'onde d'émission: la lumière émise quand la moélcule est fluorescente
*ses conditions de fluorescence: certains molécules ne sont fluorescentes qu'à certains conditions.
En pratique courante, pour minimiser les plages de longueurs d'ondes à considérer, les lumières d'excitation sont produites par des lasers, fournissant une lumière monochromatique.
==Le transfert d'énergie==
Il est possible d'associer deux fluorochromes entre eux, pour obtenir un transfert energétique entre les deux.
Ainsi, une molécule fluorescente A absorbe un photon d'énergie λ1. Elle emet un photon λ2. Une molécule B absorbe un photon d'énergie λ2, et émet un photn λ3. Si on couple ces deux molécules et qu'on fournit des photons λ1 à la molécule A+B, la lumière émise sera composée de photons d'énergie λ3. Ainsi, en excitant A, on a permis à B d'emettre sa fluorescence spécifique. C'est le principe de base qui permet l'extension des gammes de molécules fluorescentes: ainsi, il existe un fluorochrome, la phycoérythrine, qui peut être couplé à diverses types de molécules fluorescentes (cyanines, Texas Red, par exemple), et ainsi, avec la même source de lumière, on pourra différencier diverse lumières émises.
==Voir aussi==
*[[Cytométrie en flux/Annexe/Fluorochromes usuels|Liste des fluorochromes usuels]]
[[Catégorie:Cytométrie en flux]]
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