Cytométrie en flux/Le phénotypage

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Le phénotypage est le fait d’utiliser un cytomètre en flux et des anticorps fluorescents pour déterminer la présence ou non de protéines particulières sur ou dans une cellule. Les questions posées sont généralement :

• La protéine d'intérêt est-elle présente dans les cellules de mon échantillon ?
• Y a-t-il des différences dans l’expression de cette protéine selon les échantillons ?

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Marquages membranaires

On observe une molécule fluorescente en surface de la cellule. Le plus souvent, on utilise un anticorps fluorescent, et on compare l'intensité du marquage avec un contrôle négatif, généralement l'isotype contrôle de l'anticorps utilisé.

Marquages intracellulaires

On observe la présence d'une molécule dans la cellule, et non à sa surface. Pour ce faire, on a fixé et perméabilisé les cellules avant d'ajouter l'anticorps dirigé contre la protéine d'intérêt.